随着人口老龄化，高效急慢性肾病的液相荧光液透患病率在全球范围内呈逐年上升的趋势。肾衰竭已成为各国关注的色谱疾病问题，目前临床肾脏替代疗法主要有血液透析、法测酚腹膜透析和肾脏移植。定血由于肾脏移植价格昂贵，析器血液透析为主要的中双肾脏替代治疗方式。 血液透析器由空心纤维透析膜、壳体、密封层组成，其中壳体多为聚碳酸酯材质，空心纤维透析膜常用聚砜、聚醚砜、聚酰胺、醋酸纤维素等膜材。聚碳酸酯及聚醚砜的主要合成原料为双酚A，是一种内分泌干扰物，据研究表明塑料制品使用时释放出的双酚A被引入人体后可能会导致糖尿病、心脑血管及生殖系统等疾病，从而影响身体的正常机能。基于双酚A的安全风险，中国、美国、欧盟等国家限制了其在奶瓶及食品包装材料中的应用。肾衰竭患者在进行透析治疗时血液及透析液均与血液透析器直接接触，血液透析器聚碳酸酯外壳及聚砜透析膜中的双酚A单体可能会迁移至患者血液，从而给患者带来较高的风险，所以需对血液透析器中双酚A的溶出量进行研究。 目前，双酚A测定有色谱-质谱联用法、电化学分析法、免疫分析法、荧光分析法等。AstridBacle等对透析器中双酚A的测定采用固相萃取-超高液相色谱-质谱联用法，操作复杂且成本较高，不易于方法的普及。电化学分析法是基于溶液电化学性质的化学分析方法，选择性较差，测定时需特殊修饰的电极。免疫分析方法有较高的灵敏度和选择性，但抗体制备成本较高且周期长。于杰等采用高效液相色谱荧光法测定食品包装材料中双酚A的迁移量。目前，高效液相色谱荧光法测定双酚A尚未应用于医疗器械领域，并且聚砜中空纤维膜中双酚A的溶出研究鲜有报道。由于样品基质较为复杂，分析测定时干扰较多，鉴于高效液相色谱荧光法具有较高的灵敏度、准确性、选择性及重复性等特点，笔者选用该方法用于聚碳酸酯及聚砜中空纤维膜中双酚A溶出量的测定，以甲醇为替代溶剂，模拟临床使用条件加严浸提血液透析器中的双酚A，采用乙腈和醋酸铵缓冲盐为流动相，通过优化浸提条件及色谱条件等相关因素，建立灵敏、高效、准确的测定方法，可用于评估血液透析器中双酚A溶出量，为该类产品安全性风险评估提供数据支持，为监管部门提供技术支持。 1 实验部分1.1 主要仪器与试剂高效液相色谱仪：1260型，配荧光检测器，美国安捷伦科技有限公司。滚压泵：JHBP-2000型，广州市暨华医疗器械有限公司。pH计：SevenExcellence型，梅特勒-托利多控股有限公司。数显电子恒温水浴锅：HH-8型，常州国华电器有限公司。超纯水系统：Milli-QA10型，美国密理博公司。旋转蒸发仪：RV10control型，德国IKA集团。数控超声波清洗器：KQ3200DE型，昆山市超声仪器有限公司。控制型控温摇床：KS4000icontrol，德国IKA集团。双酚A对照品：纯度为99.8%，编号为30074，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。甲醇、乙腈：色谱纯，德国默克公司。醋酸、醋酸铵：分析纯，国药集团化学试剂有限公司。实验用水为超纯水。 1.2 溶液配制双酚A系列标准工作溶液：精密称取双酚A对照品10.62mg于50mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解、稀释、定容，得质量浓度为102.4μg/mL的标准储备液，采用逐级稀释法分别配制质量浓度为51.2、102.4、204.8、409.6、1024ng/mL的双酚A系列标准工作溶液。醋酸铵缓冲溶液：精密称取1.54g醋酸铵于1L容量瓶中，用水溶解、稀释、定容，用醋酸调节pH至4.0。 1.3 色谱条件色谱柱：WatersBEHShieldRP18型色谱柱［150mm×4.6mm，3.5μm，沃特世科技（上海）有限公司］；激发波长：232nm；发射波长：314nm；柱温：30℃；进样体积：10μL；流动相：A相为乙腈；B相为醋酸铵缓冲溶液，梯度洗脱条件列于表1。
1.4 样品预处理参照血液透析器临床使用说明，按图1所示连接血液透析器及硅胶管路，分别形成2个独立的循环系统，在玻璃烧杯中各加入1000mL超纯水，通过滚压泵注满整个闭路系统，以200mL/min的流量分别冲洗血液透析器血液侧与透析液侧，冲洗完毕后吹入氮气去除血液透析器中的液体。按图2所示连接血液透析器及硅胶管路形成闭合循环系统，溶剂瓶中加入500mL甲醇，通过滚压泵在（37±1）℃下以200mL/min的流量循环5h，循环完毕后将硅胶管路及血液透析器中浸提液转移至溶剂瓶，溶剂瓶中加入甲醇至溶液体积为600mL，即得样品浸提液。取500mL甲醇于溶剂瓶，使用硅胶管形成闭合循环回路，通过滚压泵在（37±1）℃下以200mL/min的流量循环5h，将循环管路中甲醇转移至溶剂瓶，溶剂瓶中加入甲醇至溶液体积为600mL，即得得空白对照液。分别量取空白对照液和样品浸提液100mL旋蒸至干，精密移取2.0mL甲醇至旋蒸瓶，涡旋至残渣完全溶解，用0.45μm滤膜过滤，得空白供试液和样品供试液。
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